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RNA提取試劑盒操作的詳細(xì)步驟

更新時間:2023-05-26  |  點擊率:1028
  RNA提取試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組,不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實驗。
  RNA提取試劑盒操作步驟
  使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇,加入到離瓶口約0.5-1cm距離,蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8條件下進行。
  1、取病毒上清液0.5ml,12000rpm離心5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀(如無沉淀可省去此步)。
  2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,65消化10min,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
  3、吸附柱前處理:從包裝中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul洗柱液,室溫放置2分鐘,2-812000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中待用。
  4、向病毒上清中加入500ul結(jié)合液,充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響RNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置2min。(吸附柱的最大容積為750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。)
  5、12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
  6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
  7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
  8、12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
  9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65水浴預(yù)熱的RNasefreeddH2O,室溫放置5min,12000rpm離心2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。
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