細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)，是細(xì)胞生物學(xué)的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)。了解細(xì)胞培養(yǎng)的目的、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)步驟等知識(shí)，有利于培養(yǎng)出更健康的細(xì)胞，更好地應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)中。

本期內(nèi)容，我們來(lái)探討細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，常見(jiàn)的液體試劑。

培養(yǎng)基是細(xì)胞賴(lài)以生存的液體環(huán)境的提供者，人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，為細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基是水、無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸等成分的混合溶液。一般情況下，會(huì)通過(guò)補(bǔ)加血清或是各類(lèi)不同等成分，配制為適合不同細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)中，可以通過(guò)ATCC查詢所培養(yǎng)的細(xì)胞適合什么類(lèi)型的培養(yǎng)基，配制比例是多少。

培養(yǎng)基可以是粉劑或液體，英文均為medium。

培養(yǎng)基有助于保持培養(yǎng)體系中的pH值和滲透壓平衡，是控適宜細(xì)胞生長(zhǎng)的重要且復(fù)雜的因素。

對(duì)于一些培養(yǎng)難度較大的細(xì)胞，選擇一款能夠與細(xì)胞“契合"的培養(yǎng)基，有利于維持細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定。另外，培養(yǎng)基使用的便捷程度，也是不可忽視的一個(gè)方面。

Ausbian干細(xì)胞培養(yǎng)基，是在含微量胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，通過(guò)添加一種人永生化干細(xì)胞系的條件培養(yǎng)基混合組成，是一款即用型培養(yǎng)基。解凍后即可參與干細(xì)胞培養(yǎng)，無(wú)需二次配制，方便快捷且高效。

根據(jù)供體動(dòng)物或采血時(shí)間的差異，血清分為許多種類(lèi)。用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要有牛血清、馬血清、豬血清等。其中，牛血清的使用更為廣泛，胎牛血清憑借其豐富的營(yíng)養(yǎng)，支持多種細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的特性，深受科研人員喜愛(ài)。

合格的胎牛血清，應(yīng)采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血，內(nèi)毒素含量也應(yīng)嚴(yán)格控制，過(guò)高的內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞提前衰老、凋亡，細(xì)胞狀態(tài)變差，相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也容易產(chǎn)生波動(dòng)。

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，采自5-8月齡牛胚胎，澳洲血源，出廠前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控，并附詳細(xì)《檢測(cè)報(bào)告》，內(nèi)毒素含量≤3EU/ml，盡可能降低內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞的影響，為細(xì)胞創(chuàng)造一個(gè)健康的生長(zhǎng)環(huán)境，有利于實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定。

在無(wú)菌的理想狀態(tài)下，是沒(méi)有必要添加抗生素的。但由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境在實(shí)際中沒(méi)要辦法做到真正的無(wú)菌，所以很多科研人員會(huì)“習(xí)慣性、預(yù)防性"地添加抗生素。

但事實(shí)上，抗生素并不是「免死金牌」，真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟?，甚至濫用還會(huì)適得其反。

一些文獻(xiàn)中表明：β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及氨基糖甙類(lèi)抗生素，對(duì)真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用，在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯。有研究人員發(fā)現(xiàn)，抗生素（雙抗：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。

雖然抗生素對(duì)真核細(xì)胞生長(zhǎng)的影響機(jī)制至今尚未明確，但是為了細(xì)胞更好的生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確和穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡量不要隨意使用。實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境衛(wèi)生需要精心維護(hù)。

定期清潔、規(guī)范操作都是盡量避免實(shí)驗(yàn)污染的好方法。德國(guó)MB公司的支原體污染祛除試劑

細(xì)胞培養(yǎng)中，還可能會(huì)用到一些其他液體試劑。

比如用于細(xì)胞消化的胰酶，也叫細(xì)胞消化液體。常用的胰酶溶液是0.25% 、0.125％的胰蛋白酶與0.02％的二乙胺四乙酸二鈉(EDTA) 調(diào)配的溶液。該消化液可以使細(xì)胞脫離粘附表面，形成單個(gè)細(xì)胞。

酚紅指示劑，一種用于指示pH溶液，中性為紅色，酸性為黃色，堿性為紫色。但并不是所有培養(yǎng)基都要添加酚紅，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)、實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑贈(zèng)Q定

HEPES，細(xì)胞培養(yǎng)中很常見(jiàn)的一種Buffer；谷氨酰胺，可以作為細(xì)胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。但谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)在-20 ℃冰凍保存，添加到液體培養(yǎng)基后，在4℃保存，不要超過(guò)1周。