原代細胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng)，是建立細胞系的第一步。

原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛：

1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；

2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；

3. 服務(wù)于臨床實踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細胞培養(yǎng)需要一定的技巧，尤其是一些細節(jié)，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細胞培養(yǎng)的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材

取材是原代細胞培養(yǎng)過程中的第一步，也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

 

分離

一、組織塊培養(yǎng)法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動。

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3、當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1、原代培養(yǎng)的分離細胞，在初次接觸體外環(huán)境時，細胞之間會互相影響，產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，促進彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程；如果接種的細胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

2、盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

三、懸浮型原代細胞

1、必須保持細胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液，以5ml為最di限度，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

2、能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短。

培養(yǎng)

當(dāng)原代細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，就可按照正常細胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng)即可。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

一款優(yōu)質(zhì)的血清，能成為細胞實驗的“*輔助”。

Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有*優(yōu)勢：

 

1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會有多批次平行供應(yīng)，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面，提供更多免費延伸性技術(shù)幫助）。

6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務(wù)，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復(fù)凍融。

9. 免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標(biāo)簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10. 免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內(nèi)，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，為各種細胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線：

特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清（貨號：WS500T(紅點)），透析胎牛血清 （貨號：VS500TZ ）等多系列產(chǎn)品，服務(wù)更專業(yè)更精準(zhǔn)。