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原代細胞培養(yǎng)小技巧

更新時間:2022-05-23  |  點擊率:694

原代細胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng),是建立細胞系的第一步。

原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛:

  1. 為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;

  2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;

  3. 服務(wù)于臨床實踐,用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細胞培養(yǎng)需要一定的技巧,尤其是一些細節(jié),不然很容易翻車,今天給大家匯總了一些原代細胞培養(yǎng)的小技巧,希望大家能有所收獲!

取材

取材是原代細胞培養(yǎng)過程中的第一步,也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項。

 

分離

 

一、組織塊培養(yǎng)法

 

1、組織塊接種后的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上,要避免頻繁晃動。

 

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

 

3、當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。

 

4、為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

 

二、貼壁型原代細胞

 

1、原代培養(yǎng)的分離細胞,在初次接觸體外環(huán)境時,細胞之間會互相影響,產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì),促進彼此的存活和生長。

 

因此,接種密度要適宜。如果接種的細胞密度過低,細胞之間的促生長作用很小,也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程;如果接種的細胞密度過大,會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

 

2、盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵??梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,待細胞貼壁后,再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

 

三、懸浮型原代細胞

 

1、必須保持細胞的懸浮狀態(tài)??梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài),如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液,以5ml為最di限度,否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞。

 

2、能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營養(yǎng)成分消耗大,換液時間隔一般較短。

培養(yǎng)

當(dāng)原代細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,就可按照正常細胞培養(yǎng)流程進行培養(yǎng)即可。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:

 

  • 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

  • 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

  • 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

  • 參與細胞凍存。

  • ......

 

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