病毒不是光對(duì)人有害，也有對(duì)人有益的、被人改造而為人類造福的，如慢病毒。它可攜帶基因，因此又被稱為慢病毒載體

慢病毒載體具有可感染分裂細(xì)胞及非分裂細(xì)胞，轉(zhuǎn)移基因片段容量較大，目的基因表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，不易引發(fā)宿主免疫反應(yīng)等諸多優(yōu)點(diǎn)。因此，慢病毒載體已成為基因治療中載體研究的熱點(diǎn)。

慢病毒能使攜帶的基因整合至宿主細(xì)胞的基因組內(nèi)，且能利用病毒攜帶的調(diào)控元件，使目的基因隨宿主細(xì)胞特異性表達(dá)。

目前，慢病毒載體還在不斷的改進(jìn)，使得它在生物安全性上不斷提高，

感染效率不斷增進(jìn)。293T，慢病毒載體的包裝細(xì)胞，為貼壁依賴型成上皮樣細(xì)胞，生長(zhǎng)培養(yǎng)基為含10%胎牛血清（FBS）的DMEM 高糖培養(yǎng)基。放于37℃，5% CO2

細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)染前48 h，用胰蛋白酶消化生長(zhǎng)狀態(tài)良好的 293T 細(xì)胞，利用含10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)基，6×105 細(xì)胞/10 mL，種植于10 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿，37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)70%～80%時(shí)即可用于轉(zhuǎn)染。良好的細(xì)胞狀態(tài)對(duì)于病毒的包裝有更好的效果。

要盡量保證細(xì)胞傳代次數(shù)在10 代以內(nèi)。轉(zhuǎn)染前2 h，將細(xì)胞培養(yǎng)基更換為無血清無抗生素的培養(yǎng)基。

收集轉(zhuǎn)染后48 h（轉(zhuǎn)染時(shí)間即可為 0 計(jì)起）的293T 細(xì)胞上清液（72h的也可收集）。以0.45 μm濾器過濾上清液于50 mL無菌無酶離心管中，病毒在4℃可以保存幾天，但要長(zhǎng)期保存，應(yīng)在-20℃或-80℃保存。

可見，慢病毒的生產(chǎn)離不開宿主細(xì)胞（如293T細(xì)胞）的良好狀態(tài)。高品質(zhì)的胎牛血清則是293T細(xì)胞生長(zhǎng)的必要保證。

下面介紹質(zhì)量和服務(wù)較好的胎牛血清應(yīng)具備的要素：

 1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。

    2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)。

    3. 每個(gè)批次產(chǎn)量充足，如在800-2000升，試用滿意后，批號(hào)可先鎖定，避免反復(fù)更換批次，保證數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

    4. 多批次平行供應(yīng)，也可多種選擇。

    5. 具有完整的檢測(cè)報(bào)告，為項(xiàng)目申報(bào)提供支持。

    6. 血清全程冷鏈運(yùn)輸，確保無反復(fù)凍融。

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